一、实验简介

Masson染色（Masson's Trichrome Stain），又称马松三色染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，也是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。所谓三色染色通常是指染细胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。

该法染色原理是基于阴离子染料分子的大小与不同组织结构的渗透性之间的差异：小分子量的染料（如丽春红、酸性品红）更容易渗透进入结构致密、间隙较小的组织（如肌纤维），使其呈现红色；而大分子量的染料（如苯胺蓝或亮绿）则只能进入结构疏松、间隙较大的组织（如胶原纤维），使其呈现蓝色或绿色。细胞核则通常先被苏木精染成蓝黑色，与其他结构形成鲜明对比。染色过程中的关键步骤磷钼酸处理起到了分化作用，它能够去除胶原纤维上吸附的多余红色染料，并为后续的蓝色染料结合做准备，从而增强颜色对比。

骨组织的主要成分是胶原纤维。在骨生长及再生过程中，新生骨胶原纤维比较疏松，渗透性高会被大分子量的苯胺蓝染上蓝色。而随着骨组织的生长，胶原纤维会逐渐变得更加致密，交联更加紧密并沉积大量的钙离子，排列更加规则逐渐形成成熟的编织骨，渗透性逐渐降低，故在masson染色中被小分子量的丽春红和酸性品红染成红色。从而将新生的早期骨组织和成熟的骨组织区分开来。

二、实验流程

1、脱蜡至水：将石蜡切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ15min以去除石蜡，再经梯度酒精（无水乙醇、95%、85%...）脱水，用自来水或者蒸馏水清洗，使组织完全复水，为染色做准备。

2、细胞核染色：用Weigert铁苏木素染色液或者Mayer苏木精染色液对细胞核进行染色5-10min，流水冲洗后1%盐酸酒精分化15s，水洗后Masson蓝化液返蓝5min，水洗。

3、浆质染色：丽春红-酸性品红染液染色5min，肌纤维、纤维素、胞浆等成分染成红色，弱酸（0.2%冰醋酸水溶液）洗1min。

4、分化：1%磷钼酸溶液洗2-5min，在显微镜下控制至胶原纤维呈淡粉色、肌纤维仍呈红色为宜，弱酸洗1min。

5、胶原纤维复染：用苯胺蓝或亮绿溶液复染1-5min，使胶原纤维着色成蓝色或绿色，弱酸洗1min。

6、脱水、透明及封片：将切片依次经梯度酒精脱水、二甲苯透明，最后用中性树胶进行封片。

染色结果：胶原纤维、黏液、软骨呈蓝色（若为亮绿染色则呈绿色），细胞质、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。新生的早期骨组织呈蓝色，成熟的骨组织呈红色。

三、注意事项

1、客户提供固定完全的组织样本。组织离体后，选择合适的固定液和容器立即固定，固定液的量建议大于组织体积的10-15倍，固定时间建议12-24h，具体根据组织类型和大小而定。标本常温（25℃左右）或冷藏（4℃）固定，切勿冷冻结冰。 固定样本常温运输送样。运输过程中务必做好标识，避免样本混淆。 

2、石蜡切片常温保存运输，冰冻切片-80℃保存干冰运输。

四、联系咨询

攸碧艾欢迎您来电咨询实验服务，联系电话：400-681-8582。