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BCA (Bicinchoninic Acid)法是当前被广泛使用蛋白定量方法之一，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。BCA法测定蛋白浓度对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小，且不受绝大部分样品中的化学物质的影响。
BCA蛋白定量原理是蛋白质中的肽链结构在碱性环境下能与Cu2+络合生成络合物，并将 Cu2+还原成Cu+，而BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物，其在562nm处有最大光吸收值，该复合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。
本试剂盒提供了牛血清白蛋白(BSA)标准液作为蛋白质标准品溶液，用于制作标准曲线，检测范围为50-2000μg/ml，本试剂盒可用于比色皿法或微孔法检测。
（一）比色皿法（分光光度计检测）：
1、BSA标准测定溶液配制：
（1）蛋白标准品配制：室温完全融化牛血清白蛋白(BSA)标准液(5mg/ml)，混匀后取150µl 5mg/ml的BSA蛋白标准溶液，加入600μl PBS溶液稀释至750µl，使其终浓度为1mg/ml。
（2）取1mg/ml和5mg/ml的 BSA标准溶液和PBS溶液，按照下表配制BSA标准测定溶液：
|
编 号 |
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
|
BSA标准溶液(μl) |
1mg/ml |
5mg/ml |
|||||||
|
0 |
2.5 |
12.5 |
25 |
50 |
75 |
100 |
30 |
40 |
|
|
PBS溶液(μl) |
100 |
97.5 |
87.5 |
75 |
50 |
25 |
0 |
70 |
60 |
|
BSA终浓度(μg/ml) |
0 |
25 |
125 |
250 |
500 |
750 |
1000 |
1500 |
2000 |
2、BCA工作液配制：
（1）计算所需BCA工作液总量：
BCA工作液总量 =[ (BSA标准品样本个数＋待测样本个数)×复孔数+2 ]×每孔所需BCA工作液体积
（2）根据计算出的所需BCA工作液用量，将BCA试剂A和BCA试剂B按照体积比50:1的比例混合均匀，配成BCA工作液。（注：试剂A和B混合时会有沉淀形成，完全混匀后沉淀消失，注意需现配现用。）
3、定量检测：
（1）将适当体积的待测样品加入到试管中，并用PBS补足至100µl；
（2）向试管中加入2ml BCA工作液，混匀，37℃放置30分钟；
（3）测定562nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。
（4）以A562为纵坐标，BSA含量为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
（二）微孔法（酶标仪检测）：
1、BSA标准测定溶液配制：
（1）蛋白标准品配制：室温完全融化牛血清白蛋白(BSA)标准液(5mg/ml)，混匀后取150µl 5mg/ml的BSA蛋白标准溶液，加入600μl PBS溶液稀释至750µl，使其终浓度为1mg/ml。
（2）取1mg/ml和5mg/ml的 BSA标准溶液和PBS溶液，按照下表配制BSA标准测定溶液：
|
编 号 |
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
|
BSA标准溶液(μl) |
1mg/ml |
5mg/ml |
|||||||
|
0 |
0.5 |
2.5 |
5.0 |
10 |
15 |
20 |
6 |
8 |
|
|
PBS溶液(μl) |
20 |
19.5 |
17.5 |
15 |
10 |
5 |
0 |
14 |
12 |
|
BSA终浓度(μg/ml) |
0 |
25 |
125 |
250 |
500 |
750 |
1000 |
1500 |
2000 |
2、BCA工作液配制：
（1）计算所需BCA工作液总量：
BCA工作液总量 =[ (BSA标准品样本个数＋待测样本个数)×复孔数+2 ]×每孔所需BCA工作液体积
（2）根据计算出的所需BCA工作液用量，将BCA试剂A和BCA试剂B按照体积比50:1的比例混合均匀，配成BCA工作液。（注：试剂A和B混合时会有沉淀形成，完全混匀后沉淀消失，注意需现配现用。）
3、定量检测：
（1）将适当体积的待测样品加入到微孔板中，并用PBS补足至20µl。
（2）向微孔板中加入200μl BCA工作液，混匀，37℃孵育30min。
（3）测定562nm处的吸光值，并记录读数；以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。
（4）以A562为纵坐标，BSA含量为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
1、长期保存时，若发现BCA试剂A或试剂B出现沉淀，请37℃温育并伴随搅拌使其充分溶解。
2、BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深，且显色反应会因温度升高而加快。可以37℃孵育30min，也可以室温孵育2h或60℃孵育30min，注意保持定时和定温，以确保精确定量。
3、因为显色反应与温度和时间的变化有关，精准蛋白定量应每次测定都做标准曲线。
4、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
5、实验员请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
BCA试剂 A、B室温保存，PBS溶液4℃保存，BSA标准液-20℃保存。有效期一年。
仅限科研使用，不能应用于临床。
为确保信息准确，建议您以随产品附带的纸质说明书为准。电子文档内容可能因版本更新而存在延迟，仅供参考。
BCA蛋白定量试剂盒
货号：UBI2001
规格：200T
价格：188 元
应用范围： 总蛋白定量
产品类型：
保存温度：室温/4℃/-20℃
产地： YOBIBIO
库存：现货
BCA蛋白定量试剂盒
货号：UBI2002
规格：500T
价格：298 元
应用范围： 总蛋白定量
产品类型：
保存温度：室温/4℃/-20℃
产地： YOBIBIO
库存：现货
BCA蛋白定量试剂盒
货号：
规格：
价格： 元
应用范围： 总蛋白定量
产品类型：
保存温度：室温/4℃/-20℃
产地： YOBIBIO
库存：
BCA蛋白定量试剂盒
货号：
规格：
价格： 元
应用范围： 总蛋白定量
产品类型：
保存温度：室温/4℃/-20℃
产地： YOBIBIO
库存：
BCA蛋白定量试剂盒
货号：
规格：
价格： 元
应用范围： 总蛋白定量
产品类型：
保存温度：室温/4℃/-20℃
产地： YOBIBIO
库存：
