外泌体(Exosomes)是细胞主动分泌的纳米级(40-200nm)细胞外囊泡,具有典型的脂质双分子层膜结构。它们广泛存在于血液、唾液、尿液、乳汁及细胞培养上清等生物体液中,作为细胞间通讯的关键信使,携带并传递蛋白质、mRNA、miRNA、DNA等重要功能分子,参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程。
目前外泌体提取主要有超速离心、过滤离心、试剂盒提取等方法。其中根据外泌体的大小和密度,用不同的离心速度,达到分离出外泌体的超速(差速)离心法,是目前用的比较多且较认可的外泌体的提取方法,被认为是外泌体提取的黄金方法。本公司具备贝克曼超高速离心机,随到随分,效率高,质量有保证。
二、实验流程
1、收集样本
(1)细胞培养上清:使用无外泌体血清的培养基给对数生长期细胞换液,培养24-48h后收集上清,以避免血清源外泌体干扰。(推荐使用YOBIBIO无外泌体血清Exosome Depleted FBS,货号U45-852A)
(2)血清/血浆:全血采集后,血清样本需静置凝固后离心分离,血浆样本需使用抗凝剂并及时离心分离。
2、低速离心去除细胞、碎片及杂质。
3、超速离心获得外泌体沉淀。
4、外泌体纯化。
5、BCA法检测外泌体浓度。
1、客户提供血清、血浆或细胞培养上清,或委托我公司代为培养细胞以收集细胞上清。
细胞培养上清样本:一个样本提供50-100ml的培养上清,-80℃保存,干冰运输。
血清样本:全血室温静置2h或4℃过夜,4℃ 3000r/min离心15min,取上清,3-5ml,-80℃保存,干冰运输。
血浆样本:EDTA抗凝管采集血样后30min内4℃ 3000r/min离心15min,取上清,3-5ml,-80℃保存,干冰运输。
2、公司提供基本实验步骤、原始图片、数据分析结果报告。
攸碧艾欢迎您来电咨询实验服务,联系电话:400-681-8582。