外泌体(Exosomes)是细胞主动分泌的纳米级(40-200nm)细胞外囊泡,具有典型的脂质双分子层膜结构。它们广泛存在于血液、唾液、尿液、乳汁及细胞培养上清等生物体液中,作为细胞间通讯的关键信使,携带并传递蛋白质、mRNA、miRNA、DNA等重要功能分子,参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程。
纳米颗粒跟踪分析(Nanoparticle TrackingAnalysis, NTA)是对每个颗粒的布朗运动进行追踪和分析,结合Stockes-Einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度,检测10nm-1000nm范围内的颗粒。NTA技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一。相较于其他表征方式,NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。
1、样本准备:提供纯化后的外泌体悬液。样本需尽可能纯净,以减少杂质干扰。原始样本通常需要用水或PBS进行稀释,以达到仪器的最佳检测浓度范围。
2、仪器校准:正式检测前,需对仪器进行校准。
3、上机检测:用注射器将稀释好的样本缓慢注入洁净的样本室中。设置合适的检测参数,启动检测。
4、数据分析:软件分析生成粒径分布图和浓度数据。
1、仪器的最佳检测区间是107 particles/mL,浓度检测下限为105 particles/mL,检测所需样品量不少于3ml。通常情况下实验室会对原始样本稀释后上样。
2、建议外泌体送样量为30-50μl(BCA≥0.2ug/ul),PBS重悬。样本保存于小EP管中,干冰运输。
3、公司提供基本实验步骤、粒径分布图、平均粒径、主要峰位、颗粒浓度等信息的实验报告。
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仪器设备:马尔文纳米颗粒跟踪分析仪Nanosight NS300