攸碧艾（上海）生物技术有限公司-外泌体系列产品-TRezol Reagent总RNA提取试剂

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TRezol Reagent总RNA提取试剂

应用范围： RNA提取试剂

产品类型： 分子类产品

保存温度： 室温

产地： YOBIBIO

请选择规格：

100ml

货号：U1011-100
价格：680 元
库存：现货

200ml

货号：U1012-200
价格：1088 元
库存：现货

产品简介
产品资料
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产品描述：

本试剂是广谱型总RNA提取试剂，适用范围广泛，可以从动物组织、培养细胞、植物及各种微生物等样品中提取总RNA。本试剂对少量的组织（50-100mg）和细胞（5×106个）以及大量的组织（≥1g）和细胞（>107个）均有较好的分离效果。

本试剂操作快速方便，颜色鲜明，便于分层。样品在TRezol中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。加入氯仿混匀并离心后，溶液会分成三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，RNA分布在上清层中。收集上清层后，经异丙醇沉淀即可得到总RNA。

本试剂提取的总RNA完整性好，纯度高，无蛋白和DNA污染，溶于DEPC水或不含RNase的超纯水后的A260/280值为1.8-2.0，可直接用于RT-PCR、Real-time RT-PCR、cDNA克隆、纯化mRNA、Northern blot、Dot blot、体外翻译、以及RNase protection assay等各种分子生物学常规实验，也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的实验。

产品特点：

1、使用简单，操作便捷。

2、具有出色的裂解能力，可同时提取RNA、DNA和蛋白质。

3、适用范围广，适用于组织、细胞、植物、微生物等多种样品类型。

4、适用于少量样品（50-100mg组织、5×10⁶个细胞）和大量样品（≥1g组织或≥1×10⁷个细胞）。

5、可最大限度保持RNA的完整性，提取的RNA质量高可用于多种实验。

使用说明：

1、样本裂解：

（1）对于植物组织，取新鲜植物组织剪碎后在液氮中充分研磨后加入TRezol，或者将植物组织剪碎后直接在TRezol中迅速研磨，每50-100mg植物组织加入1ml TRezol，混匀。（注意：样品体积一般不要超过TRezol体积的10%。）

（2）对于动物组织，取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎，在液氮中充分研磨后加入TRezol，或者将动物组织剪碎后直接在TRezol中迅速研磨，每30-100mg动物组织加入1ml TRezol，使用匀浆仪进行匀浆处理。（注意：样品体积一般不要超过TRezol体积的10%。）

（3）对于贴壁细胞，尽量去除培养液，每10cm2细胞加入1ml TRezol覆盖完全，晃动培养板几次后反复吹打使细胞裂解完全。（注意：依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRezol量，一般6孔板每孔加1ml TRezol，12孔板每孔加0.5ml TRezol。当TRezol用量不足时可能导致抽提的RNA中有DNA污染。贴壁培养细胞往往不能完全从培养板脱落，这并不意味着裂解不完全，此时细胞膜实际已经完全破裂，并已释放出全部RNA，继续操作即可。）

（4）对于悬浮细胞，离心收集细胞，尽量去除培养液。每5-10×106的动植物细胞、酵母菌细胞或每1×107细菌加1ml的TRezol，反复吹打使细胞裂解完全。（注意：在加入TRezol前应避免洗涤细胞，以免增加mRNA降解的可能性。裂解某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器以确保裂解完全。）

2、将裂解样品剧烈震荡后在室温条件下放置5min使核蛋白体完全解离。

3、可选步骤：如样品中含有较多蛋白质、脂肪、多糖或肌肉、植物的块茎结节等可4℃条件下12,000rpm离心10min，离心后的沉淀中包含有细胞外膜、多糖及高分子量DNA，上清中含有RNA，取上清层进行下一步。处理脂肪组织的样品时，上层为油脂应吸除，取澄清的匀浆液进行下一步。

4、每1ml TRezol加0.2ml氯仿。盖紧管盖，剧烈震荡15s并将其在室温下放置2-3min。

5、在4℃ 12,000rpm离心10-15min。离心后分成三层：下层红色有机苯酚氯仿层，中间层，上层无色水样层。RNA存在于水样层当中，水样层的体积约为所加TRezol体积的50-60%。

6、将水样层转移到一干净的离心管中，加入等体积异丙醇。颠倒数次混匀后室温静置10min。

7、室温或4℃ 12,000rpm离心10min，离心后在管侧和管底可见RNA胶状沉淀，弃上清。

8、加入75%乙醇颠倒混匀，洗涤沉淀。每使用1ml TRezol用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。

9、室温或4℃ 12,000rpm离心3min，弃上清，注意小心操作，不要丢失RNA沉淀。（注意：剩余的少量液体可短暂离心后吸弃，注意不要吸弃沉淀。）

10、RNA沉淀室温放置2-3min，晾干。加入30-100μl RNase-free water或DEPC水，充分溶解，保存于-70℃。（注意：沉淀不要过分干燥，以免难溶解和降低A260/280值。）

注意事项：

1、新鲜样本如果不能及时抽提RNA，建议先加入适量TRezol匀浆或裂解后（在加入氯仿处理前），置于-70℃，可冻存一个月以上。

2、保存在75%乙醇中的RNA沉淀，可在2-8℃保存一周，可在-20℃保存1年。RNA半衰期较短，易降解，建议RNA提取后尽快进行后续实验。

3、若后续实验对DNA非常敏感，建议使用DNase I（RNase free）对提取的RNA进行处理。

4、请自备试剂氯仿、无水异丙醇（新开封或提取RNA专用）、75%乙醇（用DEPC水配制）、RNase-free water或DEPC水。

5、提取RNA过程中使用的所有离心管、枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。

6、不要对着RNA样品呼气或说话，以防RNA酶污染，建议戴一次性口罩操作。

7、本试剂含有毒物质，必须戴一次性手套操作，避免接触或吸入人体。为防止溅入眼睛，请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤不慎接触本试剂，请立即用大量去垢剂和清水冲洗，如仍有不适，请立即就医。

8、本产品仅作体外科学研究用，不可用于临床诊断。

9、实验员请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

常见问题：

问题	可能的原因
产量低	样本裂解/匀浆不完全，或RNA沉淀未完全溶解。
A260/A280 <1.65	样本量太少，或吸取的水样上层被中间层污染。
RNA降解	RNA沉淀未完全溶解，或新鲜细胞/组织未立即处理或冷冻，或细胞被胰酶消化过度，或提取环境（耗材/试剂）中含RNase。
DNA污染	TRezol用量过少，或样本中可能含有机溶剂、强缓冲液或碱性溶液等。