产品描述：

CCK-8（Cell Count Kit-8）是一种利用WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）快速检测细胞增殖或毒性试验的方法。WST-8是一种类似MTT的四唑盐，在电子耦合试剂的存在下，被活细胞内的脱氢酶还原生成水溶性的橙黄色Formazan（甲臜），通过比色法检测甲臜生成量可以反映试验中活细胞的数量。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

本试剂盒可以用于细胞增殖检测，也可以用于细胞毒性检测，或细胞生长抑制检测。本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解Formazan。可以用于大批量样品的检测。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。

WST-8对细胞无明显毒性。加入CCK-8溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间。

按照每个样本需要10μl CCK-8试剂，5 ml规格的本试剂盒可以测定500个样品，5×5 ml规格可以测定2500个样品，10×5ml规格可以测定5000个样品，25×5ml规格可以测定12,500个样品。

使用说明：

1、接种对数期的细胞至96孔板，接种数量1-5×103个/孔，每孔100μl，每组设置3-5个复孔，置于37℃培养箱培养；

2、待细胞贴壁后，加入不同浓度的药物处理细胞，置于培养箱中孵育一定的时间（如24h、48h、72h）；

3、每孔加入10μl的CCK-8试剂，轻轻混匀，置于37℃培养箱中孵育1-4h（大多数细胞孵育1h即可，具体孵育时间根据细胞类型和细胞密度等实验情况决定，可进行预实验确定孵育时间）；

4、将孵育后的细胞培养板置于酶标仪上，在450nm处检测其吸光值。

注意事项：

1、使用前先将低温保存的试剂在室温条件下放置20-30min。

2、接种对数期生长的细胞，注意使细胞分散均匀，确保每个复孔中的细胞数量一致，减少误差。

3、为了达到最佳的实验效果，建议先进行预实验，确定最佳的细胞接种密度及CCK-8试剂孵育时间。以贴壁细胞为例，接种密度约1-5×103个/孔；孵育时间为1-4h，多数细胞孵育约30min即可观察到明显的颜色变化。

4、设置空白对照，在无细胞的培养基中加入CCK-8检测，去除本底对吸光值的干扰。

5、如果OD值太高， 建议降低细胞接种密度或减少CCK-8试剂孵育时间；如果OD值太低，建议增加细胞接种密度或延长CCK-8试剂孵育时间。

6、使用96孔板进行CCK-8检测时，如果细胞培养时间较长，要注意96孔板蒸发问题。可以在待检测细胞的周围一圈孔中加相同量的PBS、水或培养液，同时把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方以缓解蒸发。

7、本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化反应，所以还原剂的存在会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需要设法提前去除。

8、用酶标仪检测前要确保96孔板内没有气泡，否则会影响检测结果。

9、本产品仅作体外科研使用，不可用于临床诊断或治疗。

10、实验员请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

保存方法：

4℃保存，一年有效；-20℃保存，两年有效。

使用范围：

仅限科研使用，不能应用于临床。