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Cell Counting Kit(CCK-8)试剂盒

应用范围: 细胞培养
产品类型: 细胞转染/增殖试剂
保存温度: 2-8℃
产地: YOBIBIO
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产品描述:

CCK-8(Cell Count Kit-8)是一种利用WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)快速检测细胞增殖或毒性试验的方法。WST-8是一种类似MTT的四唑盐,在电子耦合试剂的存在下,被活细胞内的脱氢酶还原生成水溶性的橙黄色Formazan(甲臜),通过比色法检测甲臜生成量可以反映试验中活细胞的数量。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

本试剂盒可以用于细胞增殖检测,也可以用于细胞毒性检测,或细胞生长抑制检测。本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素,所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞,不必收集细胞,也不必采用额外的步骤去溶解Formazan。可以用于大批量样品的检测。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。

WST-8对细胞无明显毒性。加入CCK-8溶液显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读板,使检测时间更加灵活,便于找到最佳测定时间。

按照每个样本需要10μl CCK-8试剂,5 ml规格的本试剂盒可以测定500个样品,5×5 ml规格可以测定2500个样品,10×5ml规格可以测定5000个样品,25×5ml规格可以测定12,500个样品。

使用说明:

1、接种对数期的细胞至96孔板,接种数量1-5×103个/孔,每孔100μl,每组设置3-5个复孔,置于37℃培养箱培养;

2、待细胞贴壁后,加入不同浓度的药物处理细胞,置于培养箱中孵育一定的时间(如24h、48h、72h);

3、每孔加入10μl的CCK-8试剂,轻轻混匀,置于37℃培养箱中孵育1-4h(大多数细胞孵育1h即可,具体孵育时间根据细胞类型和细胞密度等实验情况决定,可进行预实验确定孵育时间);

4、将孵育后的细胞培养板置于酶标仪上,在450nm处检测其吸光值。

注意事项:

1、使用前先将低温保存的试剂在室温条件下放置20-30min。

2、接种对数期生长的细胞,注意使细胞分散均匀,确保每个复孔中的细胞数量一致,减少误差。

3、为了达到最佳的实验效果,建议先进行预实验,确定最佳的细胞接种密度及CCK-8试剂孵育时间。以贴壁细胞为例,接种密度约1-5×103个/孔;孵育时间为1-4h,多数细胞孵育约30min即可观察到明显的颜色变化。

4、设置空白对照,在无细胞的培养基中加入CCK-8检测,去除本底对吸光值的干扰。

5、如果OD值太高, 建议降低细胞接种密度或减少CCK-8试剂孵育时间;如果OD值太低,建议增加细胞接种密度或延长CCK-8试剂孵育时间。

6、使用96孔板进行CCK-8检测时,如果细胞培养时间较长,要注意96孔板蒸发问题。可以在待检测细胞的周围一圈孔中加相同量的PBS、水或培养液,同时把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方以缓解蒸发。

7、本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化反应,所以还原剂的存在会干扰检测,如果待检测体系中存在较多的还原剂,需要设法提前去除。

8、用酶标仪检测前要确保96孔板内没有气泡,否则会影响检测结果。

9、本产品仅作体外科研使用,不可用于临床诊断或治疗。

10、实验员请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

保存方法:

4℃保存,一年有效;-20℃保存,两年有效。

使用范围:

仅限科研使用,不能应用于临床。



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