产品描述：

攸碧艾的RNA转染试剂R-100 RNA Transfection Reagent是一种独有的RNAi特异性阳离子脂质体转染试剂，本品适用于将siRNA、microRNA (miRNA)、miRNA mimic、miRNA inhibitor等小片断RNA转染入动物细胞（包括各种细胞系、原代细胞、悬浮细胞、昆虫细胞等）。

本产品在多种细胞系的验证中均表现出优秀的RNA转染效率，并且细胞毒性很低。

产品特点：

1、转染效率高，所需RNAi浓度低，基因表达效果好，非特异性效应极少。

2、针对miRNA拮抗剂和模拟物具有出色的转染效率。

3、细胞毒性低，易于优化，可用于多种细胞类型。

4、简单、高通量的即用型转染。

5、可常温运输。

使用说明：

不同的细胞类型和不同面积的孔板转染操作略有不同，以24孔板siRNA转染为例。

1、接种细胞：

对于贴壁细胞，提前将细胞接种在24孔板中，过夜培养至细胞贴壁且细胞汇合度在30%-50%时转染。转染前全培养基总量为0.45ml。

对于悬浮细胞，采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的2/3时进行转染实验。

2、转染步骤：

（1）取一无菌无酶离心管加入无血清稀释液和0.67ug(50pmol)的siRNA，充分混匀，制成终体积为25μl的RNA稀释液（无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640），室温静置5min。

（2）取另一新的无菌无酶离心管加入24ul无血清稀释液和1ul的R100，充分混匀，制成终体积为25μl的R100稀释液，室温静置5min。

（3）将R100稀释液和RNA稀释液混合并轻轻吹打均匀，室温静置15min即完成转染复合物的制备。

（4）将50μl转染复合物滴加到含有0.45ml完全培养基（可含10%血清和抗生素）的细胞上，混合均匀。

（5）转染后6小时观察细胞状态，如状态良好可不必更换培养基，继续培养24-96小时得到结果。

3、优化：由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。根据优化实验结果，固定RNA(μg)：转染试剂量(μl)的比值，按培养器皿表面积比例应用到其他培养容器。

注意事项：

1、siRNA转染后，继续培养24-72小时在mRNA水平得到结果，继续培养24-96小时在蛋白水平得到结果。miRNA转染后，根据需要在24小时后得到结果。

2、由于血清和培养条件等差异，转染后在显微镜下可能观察到培养基中出现少量黑点状沉淀，大概率为转染试剂和血清中蛋白结合产物，不影响转染结果和细胞状态，可通过换液除去。

3、整个转染实验过程中要注意无菌操作，避免细胞被污染污染。

4、由于不同细胞耐受性不同，建议在做批量实验前先进行预实验，设置梯度用量摸索最佳siRNA和R-100的混合比例。优化后可根据自身细胞情况决定具体用量。

5、采用本品进行转染时，RNA用质量(μg)进行计量，对于21nt双链的siRNA，1OD=3.0nmol=40μg。

6、siRNA等较短RNA请参照表1中siRNA用量，miRNA、shRNA等较长RNA请参照表1中miRNA用量。

7、如转染后需要提取RNA，建议转染后6小时换液。

8、本产品仅作体外科研使用，不可用于临床诊断或治疗。

9、实验员请穿实验服并佩戴一次性手套操作，建议佩戴适当的防护眼镜。使用时注意有效防护，请勿接触人体，如果不慎接触，应立即用大量的水冲洗，若身体不适应立即前往医院治疗。

保存方法：

4℃保存，2年有效，切勿冻存。冰袋或者湿冰运输，短时间内可室温运输，但需避免光源热源。

使用范围：

仅限科研使用，不能应用于临床。