产品描述：

新型转染试剂U-200 Transfection Reagent是一种新型阳离子脂质体转染试剂，适用于将核酸（DNA和RNA）转染入真核细胞，可在各种哺乳动物贴壁和悬浮细胞系中提供高效转染，同时具有极低的细胞毒性。

本产品适用细胞类型广，转染时血清和抗生素的存在不影响转染效率，并且转染可以无需更换培养基。

产品特点：

1、转染效率高。

2、细胞毒性极低（细胞存活率>90%）。

3、操作简便，转染后无需更换培养基。

4、适用于高通量应用的可靠性能。

5、适用于各种哺乳动物细胞系的转染。

使用说明：

不同的核酸类型、细胞类型和不同面积的孔板转染操作略有不同，以24孔板siRNA转染为例。

1、接种细胞：

对于贴壁细胞，提前将细胞接种在24孔板中，过夜培养至细胞贴壁且细胞汇合度在30%-50%时转染。转染前全培养基总量为0.45ml。

对于悬浮细胞，采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3时进行转染实验。

2、转染步骤：

（1）取一无菌无酶离心管加入无血清稀释液和10pmol的siRNA，充分混匀，制成终体积为25μl的RNA稀释液（无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640），室温静置5min。

（2）取另一新的无菌无酶离心管加入24.5ul无血清稀释液和0.5ul的U-200，充分混匀，制成终体积为25μl的U-200稀释液，室温静置5min。

（3）将R100稀释液和RNA稀释液混合并轻轻吹打均匀，室温静置20min即完成转染复合物的制备。

（4）将50μl转染复合物滴加到含有0.45ml完全培养基（可含10%血清和抗生素）的孔中，混合均匀。

（5）转染后4-6小时观察细胞状态，如状态良好可不必更换培养基，继续培养24-72小时得到结果。

3、优化：

由于核酸序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了核酸和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。根据优化实验结果，固定RNA(μg)：转染试剂量(μl)的比值，按培养器皿表面积比例应用到其他培养容器。

注意事项：

1、本产品可在血清和抗生素的存在下使用，为了得到更高的转染效果，推荐使用无血清的OPTI-MEM培养基(U21-08100F/U21-08500F)，也可以用培养细饱的无血清DMEM或RPMI1640替代。

2、转染不同核酸时的细胞汇合度不同，建议转染siRNA时细胞汇合度30%-50%，转染DNA时细胞汇合度70%-90%。不同细胞转染适合的汇合度也有所不同，具体根据细胞情况选择适合的细胞汇合度进行转染。

3、由于不同细胞耐受性不同，我们建议您在做批量实验前先进行预实验，设置梯度用量摸索最佳核酸和U-200的混合比例。优化后可根据自身细胞情况决定具体用量。

4、整个转染实验过程中要注意无菌操作，避免细胞被污染污染。

5、转染4-6小时可以不换液，但因为转染试剂U-200具有较低的细胞毒性，作用时间过长仍然可能使某些细胞出现状态不佳甚至死亡现象，所以建议换液。

6、如转染后需要提取RNA，建议转染后6小时换液。

7、本产品仅作体外科研使用，不可用于临床诊断或治疗。

保存方法：

4℃保存，2年有效，切勿冻存。冰袋或者湿冰运输，短时间内可室温运输，但需避免光源热源。

使用范围：

仅限科研使用，不能应用于临床。