产品描述： 

本产品是一种基于Calcein-AM（钙黄绿素AM）和PI（碘化丙啶）的双荧光染色法快速便捷地检测体外培养的细胞中活细胞和死细胞的试剂。

Calcein-AM是一种可以对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，因其在传统的Calcein（钙黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞，本身不发荧光的Calcein-AM被活细胞内的酯酶水解，形成膜非渗透性的带有强负电荷的极性分子Calcein，从而被滞留在活细胞内并发出强绿色荧光(Ex=490nm, Em=515nm)。由于死细胞缺乏酯酶或酯酶活性很低，因此死细胞不能或很少产生Calcein，不能被染色或者染色非常弱。Calcein-AM仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。

碘化丙啶(Propidium iodide, PI)不能穿过活细胞的细胞膜，仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(Ex=535nm, Em=615nm)，因此PI仅对死细胞染色。因此，Calcein-AM常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶(PI)等联合使用，同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色，用于细胞活性与细胞毒性的检测。

本试剂盒适用于荧光显微镜、荧光酶标仪及其它荧光检测系统。仅需染色15-30分钟，就可在荧光显微镜下观察到非常明亮的活细胞绿色荧光染色和坏死细胞中非常明亮的细胞核红色荧光染色。

使用说明：

1、配制Calcein-AM/PI工作液：（推荐Calcein-AM：2μM, PI：4μM）分别取10μl的Calcein-AM和20μl的PI储存溶液，加入至5ml的PBS中，充分混匀，备用（注：Calcein-AM/PI工作液必须现配现用，并且在当天用完）；

2、去除细胞培养液，用PBS洗涤细胞2次，去除培养液中的血清或酚红对本实验的干扰。

3、加入适量的Calcein-AM/PI工作液（细胞被覆盖完全即可，建议96孔板每孔100μl，24孔板每孔加入250μl，12孔板每孔加入500μl，6孔板每孔加入1ml），在37℃培养箱中孵育15-30min（不同的细胞最佳孵育时间有所不同，可以根据实际染色效果对染色时间进行适当调整和优化，以得到更加理想的染色效果）；

4、用PBS洗涤细胞2次；

5、荧光显微镜下观察细胞染色结果，Calcein-AM检测波长：Ex=490nm（蓝光激发）, Em=515nm；PI检测波长：Ex=535nm（绿光激发）, Em=615nm。