产品中文名：小鼠肿瘤坏死因子受体超家族成员5(TNFRSF5/CD40)酶联免疫吸附测定试剂盒

指标别名：TNFRSF5; CDW40; Bp50; P50; B-cell surface antigen CD40; CD40L receptor

指标简介：肿瘤坏死因子受体超家族成员5(TNFRSF5;CD40)是一种在抗原呈递细胞上发现的代价刺激蛋白，是其激活的必要条件。TH细胞上的CD154（CD40L）与CD40的结合能激活抗原呈递细胞，并诱发各种下游效应。该基因所编码的蛋白受体是TNF-受体超家族的成员。该受体已被发现在介导各种免疫和炎症反应中至关重要，包括T细胞依赖的免疫球蛋白类别转换、记忆B细胞发育和生殖中心形成。CD40的表达是多样化的,它由抗原呈递细胞组成性表达，包括树突状细胞、B细胞和巨噬细胞。它也可以由内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞和上皮细胞表达。

检测范围：15.6–1000pg/ml

灵敏度：＜2.84pg/ml

精密度：板内变异系数均＜9%，板间变异系数均＜10%

保存温度：4℃

有效期：6 个月

检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法。试剂盒提供的酶标板已包被捕获抗体，实验时将待检样品（或标准品）加入酶标板反应孔中，捕获抗体结合目的蛋白。加入生物素标记检测抗体与目的蛋白结合，再加入 SABC 与标记抗体结合，形成捕获抗体-目的蛋白-检测抗体-SABC 免疫复合物，游离成分均被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450nm 波长处检测吸光度(OD)，目的蛋白浓度与 OD450 值之间呈正相关，通过绘制标准曲线计算出样品中目的蛋白的浓度。

样品的收集和保存：

1、血清：全血样品于室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 4℃，1,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或将上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

2、血浆：用 EDTA 或肝素钠抗凝管采集全血样品，采集后 30 分钟内置于 4℃冰箱，1,000×g 离心 15分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

3、组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗组织，去除残留血液，冰上切割组织后称重。按组织重量(g): PBS 体积(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍体积的 PBS（比如 1g 的组织样品加入 9ml 的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录），加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎以充分匀浆。最后将匀浆液于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测（如需要可取部分上清进行 BCA 蛋白定量）。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

4、细胞裂解液：贴壁细胞用预冷的 PBS 轻轻清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 离心 5 分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集到的细胞用预冷的 PBS 洗涤 3 次。PBS 稀释细胞悬液，细胞浓度达到10^6个/ml 左右。通过反复冻融或超声破碎使细胞裂解。4℃，3,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

5、细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。样本处理相关试剂推荐：PBS 缓冲液（货号：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（货号：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（货号：U31-324C）。

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