产品中文名：大鼠血管内皮生长因子(VEGF)酶联免疫吸附测定试剂盒

指标别名：Vascular Endothelial Growth Factor

指标简介：血管内皮生长因子（VEGF），原名为血管通透性因子（VPF），是一种由许 多细胞产生的信号蛋白，可刺激血管的形成。具体来说，VEGF 是生长因子 的一个亚家族，即血小板衍生的生长因子家族的胱氨酸结生长因子。它们是参与血管生成（胚胎循环系统的从头形成）和血管生成（从预先存在的血管 生长）的重要信号蛋白。当血液循环不足时，如在缺氧条件下，它是恢复组织氧气供应的系统的一部分。支气管哮喘和糖尿病患者的血清中 VEGF 浓度较高。VEGF 的正常功能是在胚胎发育过程中创造新的血管，在受伤后创造新的血管，在运动后创造肌肉，以及创造新的血管（侧支循环）以绕过阻塞的血管。它可以促成疾病。固体癌症如果没有足够的血液供应，就不能超过有限的大小；能够表达血管内皮生长因子的癌症能够生长和转移。血管内皮生长因子的过度表达可导致眼睛视网膜和身体其他部位的血管疾病。 aflibercept、bevacizumab、ranibizumab 和 pegaptanib 等药物可以抑制 VEGF，控制或减缓这些疾病。

检测范围：62.5–4000pg/ml

灵敏度：＜11.36pg/ml

精密度：板内变异系数均＜9%，板间变异系数均＜10%

保存温度：4℃

有效期：6 个月

检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法。试剂盒提供的酶标板已包被捕获抗体，实验时将待检样品（或标准品）加入酶标板反应孔中，捕获抗体结合目的蛋白。加入生物素标记检测抗体与目的蛋白结合，再加入 SABC 与标记抗体结合，形成捕获抗体-目的蛋白-检测抗体-SABC 免疫复合物，游离成分均被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450nm 波长处检测吸光度(OD)，目的蛋白浓度与 OD450 值之间呈正相关，通过绘制标准曲线计算出样品中目的蛋白的浓度。

样品的收集和保存：

1、血清：全血样品于室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 4℃，1,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或将上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

2、血浆：用 EDTA 或肝素钠抗凝管采集全血样品，采集后 30 分钟内置于 4℃冰箱，1,000×g 离心 15分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

3、组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗组织，去除残留血液，冰上切割组织后称重。按组织重量(g): PBS 体积(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍体积的 PBS（比如 1g 的组织样品加入 9ml 的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录），加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎以充分匀浆。最后将匀浆液于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测（如需要可取部分上清进行 BCA 蛋白定量）。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

4、细胞裂解液：贴壁细胞用预冷的 PBS 轻轻清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 离心 5 分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集到的细胞用预冷的 PBS 洗涤 3 次。PBS 稀释细胞悬液，细胞浓度达到10^6个/ml 左右。通过反复冻融或超声破碎使细胞裂解。4℃，3,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

5、细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。样本处理相关试剂推荐：PBS 缓冲液（货号：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（货号：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（货号：U31-324C）。

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