产品中文名：人载脂蛋白A1(apo-A1)酶联免疫吸附测定试剂盒

指标别名：Apolipoprotein A1；Apo-A1; ApoA-1 Milano; ProapoA-I; Proapolipoprotein A-I; Truncated apolipoprotein A-I

指标简介：载脂蛋白A1是一种蛋白质，由APOA1基因编码。作为高密度脂蛋白颗粒的主要成分，它在脂质代谢中具有特殊作用。APOA1基因位于第11条染色体上，具体位置为11q23-q24，该基因包含4个外显子。APOA1编码一个28.1kDa的蛋白质，由243个氨基酸组成；通过质谱数据观察到21个肽。载脂蛋白A1是血浆中高密度脂蛋白颗粒的主要蛋白成分。从肠道细胞分泌的乳糜微粒也含有载脂蛋白A1，但它在血液中迅速转移到高密度脂蛋白。该蛋白作为高密度脂蛋白颗粒的一个组成部分，通过接受细胞内的脂肪（包括动脉壁内的巨噬细胞，这些巨噬细胞已被氧化的低密度脂蛋白颗粒摄入的脂肪超载），使脂肪分子外流到其他地方，包括回到低密度脂蛋白颗粒或到肝脏排泄出来。它是卵磷脂胆固醇转移酶（LCAT）的辅助因子，该酶负责大多数血浆胆固醇酯的形成。载脂蛋白A1还被分离为前列环素（PGI2）稳定因子，因此可能有抗凝血作用。它经常被用作预测心血管疾病的生物标志物。

精密度：板内变异系数均＜9%，板间变异系数均＜10%

保存温度：4℃

有效期：6 个月

检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法。试剂盒提供的酶标板已包被捕获抗体，实验时将待检样品（或标准品）加入酶标板反应孔中，捕获抗体结合目的蛋白。加入生物素标记检测抗体与目的蛋白结合，再加入 SABC 与标记抗体结合，形成捕获抗体-目的蛋白-检测抗体-SABC 免疫复合物，游离成分均被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450nm 波长处检测吸光度(OD)，目的蛋白浓度与 OD450 值之间呈正相关，通过绘制标准曲线计算出样品中目的蛋白的浓度。

样品的收集和保存：

1、血清：全血样品于室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 4℃，1,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或将上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

2、血浆：用 EDTA 或肝素钠抗凝管采集全血样品，采集后 30 分钟内置于 4℃冰箱，1,000×g 离心 15分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

3、组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗组织，去除残留血液，冰上切割组织后称重。按组织重量(g): PBS 体积(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍体积的 PBS（比如 1g 的组织样品加入 9ml 的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录），加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎以充分匀浆。最后将匀浆液于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测（如需要可取部分上清进行 BCA 蛋白定量）。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

4、细胞裂解液：贴壁细胞用预冷的 PBS 轻轻清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 离心 5 分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集到的细胞用预冷的 PBS 洗涤 3 次。PBS 稀释细胞悬液，细胞浓度达到10^6个/ml 左右。通过反复冻融或超声破碎使细胞裂解。4℃，3,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

5、细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。样本处理相关试剂推荐：PBS 缓冲液（货号：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（货号：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（货号：U31-324C）。

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