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Mouse TNF-α ELISA Kit

检测物种: Mouse
应用范围: 定量检测
产品类型: 检测试剂盒
保存温度: 2-8℃
产地: YOBIBIO
检测范围: 31.25–2000pg/ml
灵敏度: <5.68pg/ml
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产品中文名:小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)酶联免疫吸附测定试剂盒

指标别名:DIF; TNF-A; TNFSF2; Cachectin; Tumor Necrosis Factor Ligand Superfamily Member 2

指标简介:肿瘤坏死因子α(TNF-α)由中性粒细胞、活化的淋巴细胞、巨噬细胞、NK细胞、LAK细胞、星形胶质细胞内皮细胞、平滑肌细胞和一些转化细胞产生。自然发生的TNF-α形式是糖基化的,但非糖基化的重组TNF-α具有相当的生物活性。据报道,TNF-α的生物活性原生形式是一个三聚体。人类和鼠类的TNF-α在氨基酸水平上显示出大约79%的同源性,并且这两个物种之间有交叉反应。

检测范围:31.252000pg/ml

灵敏度:5.68pg/ml

精密度:板内变异系数均<9%,板间变异系数均<10%


保存温度:4℃

有效期:6 个月

检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法。试剂盒提供的酶标板已包被捕获抗体,实验时将待检样品(或标准品)加入酶标板反应孔中,捕获抗体结合目的蛋白。加入生物素标记检测抗体与目的蛋白结合,再加入 SABC 与标记抗体结合,形成捕获抗体-目的蛋白-检测抗体-SABC 免疫复合物,游离成分均被洗去。加入显色底物(TMB),TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450nm 波长处检测吸光度(OD),目的蛋白浓度与 OD450 值之间呈正相关,通过绘制标准曲线计算出样品中目的蛋白的浓度。

样品的收集和保存:

1、血清:全血样品于室温放置 2 小时或 4℃过夜,然后 4℃,1,000×g 离心 15 分钟,取上清即可检测。或将上清置于≤ -20℃冷冻保存,避免反复冻融。

2、血浆:用 EDTA 或肝素钠抗凝管采集全血样品,采集后 30 分钟内置于 4℃冰箱,1,000×g 离心 15分钟,取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存,避免反复冻融。

3、组织匀浆:用预冷的 PBS (0.01mol/L, pH=7.4) 清洗组织,去除残留血液,冰上切割组织后称重。按组织重量(g): PBS 体积(ml) =1:9 的比例,加入 9 倍体积的 PBS(比如 1g 的组织样品加入 9ml 的 PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录),加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎以充分匀浆。最后将匀浆液于 4℃,3000×g 离心 15 分钟,取上清即可检测(如需要可取部分上清进行 BCA 蛋白定量)。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存,避免反复冻融。

4、细胞裂解液:贴壁细胞用预冷的 PBS 轻轻清洗,胰蛋白酶消化,1,000×g 离心 5 分钟后收集细胞;悬浮细胞可直接离心收集。收集到的细胞用预冷的 PBS 洗涤 3 次。PBS 稀释细胞悬液,细胞浓度达到10^6个/ml 左右。通过反复冻融或超声破碎使细胞裂解。4℃,3,000×g 离心 15 分钟,取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存,避免反复冻融。

5、细胞培养上清或其他生物体液:收集液体后于 4℃,3000×g 离心 15 分钟,取上清即可检测。样本处理相关试剂推荐:PBS 缓冲液(货号:U21-259B),0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液(货号:U31-323C),0.25%胰蛋白酶消化液(货号:U31-324C)。

咨询热线:400-681-8582 021-64228065

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