中文名称：人腺苷A2A受体(ADORA2A)ELISA检测试剂盒
别名：ADORA2; RDC8; hA2AR

指标简介：腺苷A2A受体，也被称为ADORA2A，是一种腺苷受体，也表示编码它的基因。该蛋白是G蛋白偶联受体（GPCR）家族的成员，它拥有七个跨膜α螺旋，以及一个细胞外N端和一个细胞内C端。此外，在靠近膜的细胞内侧有一个小的α螺旋，通常被称为螺旋8（H8）。腺苷A2A受体的晶体结构显示了一个与其他结构确定的GPCRs（即β-2肾上腺素受体和荷尔蒙）不同的配体结合口袋。在这个初级结合口袋下面是一个二级结合口袋。A2A与拮抗剂ZM241385结合的晶体结构显示，在该蛋白的这个位置可以找到一个钠离子，因此它被称为"钠离子结合口袋"。该基因编码一种蛋白质，是腺苷的几种受体亚型之一。

检测范围：00.469–30 ng/mL
灵敏度：＜0.09ng/ml
精密度：板内变异系数均＜9%，板间变异系数均＜10%
保存温度：4℃
有效期：6 个月
检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法。试剂盒提供的酶标板已包被捕获抗体，实验时将待检样品（或标准品）加入酶标板反应孔中，捕获抗体结合目的蛋白。加入生物素标记检测抗体与目的蛋白结合，再加入 SABC 与标记抗体结合，形成捕获抗体-目的蛋白-检测抗体-SABC 免疫复合物，游离成分均被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450nm 波长处检测吸光度(OD)，目的蛋白浓度与 OD450 值之间呈正相关，通过绘制标准曲线计算出样品中目的蛋白的浓度。
样品的收集和保存：
1、血清：全血样品于室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 4℃，1,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或将上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。
2、血浆：用 EDTA 或肝素钠抗凝管采集全血样品，采集后 30 分钟内置于 4℃冰箱，1,000×g 离心 15分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。
3、组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗组织，去除残留血液，冰上切割组织后称重。按组织重量(g): PBS 体积(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍体积的 PBS（比如 1g 的组织样品加入 9ml 的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录），加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎以充分匀浆。最后将匀浆液于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测（如需要可取部分上清进行 BCA 蛋白定量）。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。
4、细胞裂解液：贴壁细胞用预冷的 PBS 轻轻清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 离心 5 分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集到的细胞用预冷的 PBS 洗涤 3 次。PBS 稀释细胞悬液，细胞浓度达到10^6个/ml 左右。通过反复冻融或超声破碎使细胞裂解。4℃，3,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。
5、细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。样本处理相关试剂推荐：PBS 缓冲液（货号：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（货号：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（货号：U31-324C）。
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