产品中文名：大鼠胰蛋白酶(Pan Trypsin)酶联免疫吸附测定试剂盒

指标别名：serine protease 1; TRP1; TRY1; TRY4; TRYP1; serine protease 3; MTG; PRSS4; T9; TRY3; TRY4; PRSS1/2/3

指标简介：胰蛋白酶属于PA族超家族中的丝氨酸蛋白酶，存在于许多脊椎动物的消化系统中，其主要功能是分解蛋白质。在十二指肠中，胰蛋白酶能够催化肽键的水解反应，将蛋白质分解成较小的肽段。这些肽段随后会通过其他蛋白酶的作用进一步被分解为氨基酸，从而被人体吸收到血液中。胰蛋白酶的消化过程对于蛋白质的吸收至关重要，因为大多数蛋白质的分子结构过于庞大，无法直接通过小肠壁被吸收。此外，胰蛋白酶最初是以无活性的前体——胰蛋白酶原的形式在胰腺中产生的。当胰腺受到胆囊收缩素的刺激时，胰蛋白酶原会通过胰管被分泌到小肠的起始部分——十二指肠中。一旦进入小肠，肠肽酶会通过蛋白水解作用将胰蛋白酶原激活为具有活性的胰蛋白酶。胰蛋白酶自身也可以利用胰蛋白酶原作为底物进行自我激活。这种激活机制在大多数丝氨酸蛋白酶中都很常见，其作用在于防止胰腺自身的降解。

精密度：板内变异系数均＜9%，板间变异系数均＜10%

保存温度：4℃

有效期：6 个月

检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法。试剂盒提供的酶标板已包被捕获抗体，实验时将待检样品（或标准品）加入酶标板反应孔中，捕获抗体结合目的蛋白。加入生物素标记检测抗体与目的蛋白结合，再加入 SABC 与标记抗体结合，形成捕获抗体-目的蛋白-检测抗体-SABC 免疫复合物，游离成分均被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450nm 波长处检测吸光度(OD)，目的蛋白浓度与 OD450 值之间呈正相关，通过绘制标准曲线计算出样品中目的蛋白的浓度。

样品的收集和保存：

1、血清：全血样品于室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 4℃，1,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或将上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

2、血浆：用 EDTA 或肝素钠抗凝管采集全血样品，采集后 30 分钟内置于 4℃冰箱，1,000×g 离心 15分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

3、组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗组织，去除残留血液，冰上切割组织后称重。按组织重量(g): PBS 体积(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍体积的 PBS（比如 1g 的组织样品加入 9ml 的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录），加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎以充分匀浆。最后将匀浆液于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测（如需要可取部分上清进行 BCA 蛋白定量）。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

4、细胞裂解液：贴壁细胞用预冷的 PBS 轻轻清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 离心 5 分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集到的细胞用预冷的 PBS 洗涤 3 次。PBS 稀释细胞悬液，细胞浓度达到10^6个/ml 左右。通过反复冻融或超声破碎使细胞裂解。4℃，3,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

5、细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。样本处理相关试剂推荐：PBS 缓冲液（货号：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（货号：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（货号：U31-324C）。

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