产品中文名：大鼠富含半胱氨酸型酸性蛋白(SPARC)酶联免疫吸附测定试剂盒

指标别名：Basement membrane protein 40; BM 40; ON; Osteonectin; SPARC

指标简介：SPARC（一种酸性且富含半胱氨酸的分泌蛋白），也被称为骨连接蛋白。在人类体内，SPARC蛋白是由SPARC基因编码产生的。人类的SPARC基因长度为26.5 kb，包含10个外显子和9个内含子，位于5号染色体的5q31-q33区域。SPARC是一种分子量为40 kD的糖蛋白。它是一种酸性且富含半胱氨酸的糖蛋白，由一条多肽链组成，该多肽链可被划分为四个结构域：1）位于氨基末端的富含谷氨酸酸基团的区域，该区域具有与钙离子结合的能力（称为I结构域）；2）富含半胱氨酸的区域（称为II结构域）；3）亲水区域（称为III结构域）；4）位于羧基末端的EF手结构域（称为IV结构域）。骨连接蛋白是一种存在于骨骼中的糖蛋白，具有与钠离子结合的能力。在骨骼形成过程中，成骨细胞会分泌骨连接蛋白，从而促进矿化作用及矿物晶体的形成。除了能与骨骼中的钙离子结合外，骨连接蛋白还能与胶原蛋白发生相互作用。研究还发现，骨连接蛋白的过度表达与壶腹癌及慢性胰腺炎之间存在一定的关联。

精密度：板内变异系数均＜9%，板间变异系数均＜10%

保存温度：4℃

有效期：6 个月

检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法。试剂盒提供的酶标板已包被捕获抗体，实验时将待检样品（或标准品）加入酶标板反应孔中，捕获抗体结合目的蛋白。加入生物素标记检测抗体与目的蛋白结合，再加入 SABC 与标记抗体结合，形成捕获抗体-目的蛋白-检测抗体-SABC 免疫复合物，游离成分均被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450nm 波长处检测吸光度(OD)，目的蛋白浓度与 OD450 值之间呈正相关，通过绘制标准曲线计算出样品中目的蛋白的浓度。

样品的收集和保存：

1、血清：全血样品于室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 4℃，1,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或将上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

2、血浆：用 EDTA 或肝素钠抗凝管采集全血样品，采集后 30 分钟内置于 4℃冰箱，1,000×g 离心 15分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

3、组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗组织，去除残留血液，冰上切割组织后称重。按组织重量(g): PBS 体积(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍体积的 PBS（比如 1g 的组织样品加入 9ml 的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录），加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎以充分匀浆。最后将匀浆液于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测（如需要可取部分上清进行 BCA 蛋白定量）。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

4、细胞裂解液：贴壁细胞用预冷的 PBS 轻轻清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 离心 5 分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集到的细胞用预冷的 PBS 洗涤 3 次。PBS 稀释细胞悬液，细胞浓度达到10^6个/ml 左右。通过反复冻融或超声破碎使细胞裂解。4℃，3,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

5、细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。样本处理相关试剂推荐：PBS 缓冲液（货号：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（货号：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（货号：U31-324C）。

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