产品中文名：大鼠沉默调节蛋白1(SIRT1)酶联免疫吸附测定试剂盒

指标别名：SIR2L1; Silent Mating Type Information Regulation 2 Homolog 1; NAD-Dependent Deacetylase Sirtuin-1; SIR2-like protein 1; SirtT1 75 kDa fragment

指标简介：沉默调节蛋白 1，也被称为 SIRT1 或 NAD 依赖性脱乙酰酶 sirtuin-1，是由 SIRT1 基因编码的蛋白质。它是一种主要位于细胞核中的酶。它是 sirtuin 蛋 白质家族的成员，是酿酒酵母中 Sir2 基因的同源物。sirtuin 家族的成员以 sirtuin 核心域为特征，分为四类。人类 sirtuin 的功能尚未确定;然而，已知 酵母 sirtuin 蛋白可调节表观遗传基因沉默并抑制 rDNA 的重组。研究表明， 人类 sirtuins 可能作为具有单 ADP-核糖基转移酶活性的细胞内调节蛋白发 挥作用。该基因编码的蛋白质包含在 sirtuin 家族的 I 类中。它在具有高胰岛 素抵抗的细胞中被下调，诱导其表达会增加胰岛素敏感性，这表明该分子与 改善胰岛素敏感性有关。此外，它被证明可以去乙酰化并影响 PGC1-α/ERR- α复合物的两个成员的活性，这是必需的代谢调节转录因子。在哺乳动物中， 它已被证明可以脱乙酰，从而使 p53 蛋白失活。它还通过防止自噬所需的蛋 白质乙酰化（通过脱乙酰化）来刺激自噬，如培养细胞、胚胎和新生儿组织 所证明的那样。该功能提供了 sirtuin 表达与细胞由于热量限制而对有限营养 素的反应之间的联系。它在激活 T 辅助 17 细胞中起作用，这有助于自身免 疫性疾病;在治疗上激活 SIRT1 的努力可能会引发或加剧自身免疫性疾病。它 与 HDAC1 和 D1 型多巴胺能培养基多棘神经元中的 AP-1 启动子复合物一 起，似乎与成瘾的发病机制密切相关。

精密度：板内变异系数均＜9%，板间变异系数均＜10%

保存温度：4℃

有效期：6 个月

检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法。试剂盒提供的酶标板已包被捕获抗体，实验时将待检样品（或标准品）加入酶标板反应孔中，捕获抗体结合目的蛋白。加入生物素标记检测抗体与目的蛋白结合，再加入 SABC 与标记抗体结合，形成捕获抗体-目的蛋白-检测抗体-SABC 免疫复合物，游离成分均被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450nm 波长处检测吸光度(OD)，目的蛋白浓度与 OD450 值之间呈正相关，通过绘制标准曲线计算出样品中目的蛋白的浓度。

样品的收集和保存：

1、血清：全血样品于室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 4℃，1,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或将上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

2、血浆：用 EDTA 或肝素钠抗凝管采集全血样品，采集后 30 分钟内置于 4℃冰箱，1,000×g 离心 15分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

3、组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗组织，去除残留血液，冰上切割组织后称重。按组织重量(g): PBS 体积(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍体积的 PBS（比如 1g 的组织样品加入 9ml 的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录），加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎以充分匀浆。最后将匀浆液于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测（如需要可取部分上清进行 BCA 蛋白定量）。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

4、细胞裂解液：贴壁细胞用预冷的 PBS 轻轻清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 离心 5 分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集到的细胞用预冷的 PBS 洗涤 3 次。PBS 稀释细胞悬液，细胞浓度达到10^6个/ml 左右。通过反复冻融或超声破碎使细胞裂解。4℃，3,000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。或取上清置于≤ -20℃冷冻保存，避免反复冻融。

5、细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于 4℃，3000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。样本处理相关试剂推荐：PBS 缓冲液（货号：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（货号：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（货号：U31-324C）。

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